第三 ， 作者发现i-GONAD在许多小鼠品系中起作用 。
在C3H/HeSlc、C57BL/6NCrSlc、DBA/2CrSlc、B6D2F1/Slc以及B6D2F1/Slc和C57BL/6NCrSlc的杂交品系的Tyr基因【Tyrosinase酪氨酸酶 ， 负责黑色素合成】进行indel突变；C3H/HeSlc和C57BL/6NCrSlc品系的Kit基因进行indel突变；C57BL/6NCrl品系的Cdkn1a和Cdkn2a基因和BALB/cAJcl品系的Tyr基因进行ssODNs位点突变 。 除C57BL/6NCrSlc小鼠的Tyr位点外 ， 所有被测位点和小鼠品系中均有基因编辑 。 可能是因为C57BL/6NCrSlc品系生育能力差和/或产仔数较少 。

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第四 ， AsCpf1核酸酶也可用于i-GONAD法 。 40只胎儿中 ， 有65%（26/40）的胎儿被基因编辑 ， 其中约65%（17/26）的胎儿为嵌合体 。 此外 ， 作者还使用AsCpf1校正了Tyr基因的G308C突变 ， 19只胎儿中 ， 有58%（11/19）眼睛有色素沉着 ， 共74%（14/19）的胎儿被基因组编辑 ， 其中约36%（5/14）的胎儿为嵌合体 。
随后 ， 作者及其同事将这项改进的技术扩展到大鼠身上 ， 发现i-GONAD可以在各种品系中创建基因编辑的大鼠（即 rGONAD方法【Rat improved GONAD】）。品系包括Sprague-Dawley和Lewis ， 以及F1杂交种（Sprague-Dawley和Brown-Norway） ， indel突变的效率约为62% ， 敲入效率约为9% [3] 。 实验方法如下：

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【利用NEPA21进行体内受精卵转染操作图示】
电转染仪

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NEPA21 电转染仪采用全新设计的电转程序 ， 特别适用于难转染细胞、离体组织或动物活体的转染 。 配合独有的电压衰减（Voltage/Decay）设计 。
NEPA21可在获得高转染效率的同时 ， 提高细胞存活率 。 专门针对难转染的原代免疫细胞、干细胞、神经细胞、活体动物、受精卵及宫内胚胎等转染 ， 多篇文献支持 ， 是Crisper/Cas-9 基因编辑中常用电转系统！
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