GSEA基因富集分析的原理就是基于该排列好的基因集,从第一个基因开始判断该基因是否存在于经过筛选的GO功能基因集中,如果存在则加分,反之减分 。所以评分过程是一个动态的过程,最终我们会得到一个评分峰值,那就是GO功能富集的评分 。加分规则通过Basic fields参数设置处的Enrichment statistic决定的 。

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接着有一个分析的结果的热图和gene list相关性的图 。
热图中展示了分别在两组处理中高表达的前50个基因,总共100个基因的表达情况 。

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gene list相关性图如下 。横坐标是已经排序好的基因,纵坐标是signal2noise的值 。虚线左侧的基因是在NGT中高表达,右侧的基因在DMT中高表达 。这部分结果报告中的面积比就是基于该图计算的,可以看出面积百分比和基因数目百分比有一定的差异,面积百分比可以从整体上反映组间信噪比的大小 。

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Butterfly plot显示了基因等级与排名指标评分之间的正相关(左侧)和负相关性(右侧) 。左侧蓝色虚线和右侧红色虚线是真实的信噪比结果,其他颜色的线是软件对数据做了随机重排后的结果 。默认情况下,图形只显示前100个基因,也就是排名第一和最后100个基因 。可以使用运行GSEA页面上Advanced fields处的Number of markers来更改显示的基因数量 。

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5. Global statistics and plots
这部分包含两个图:1) p值与归一化富集分数(NES)的对比图,这提供了一种快速、直观的方法来掌握有意义的富集基因集的数量 。2) 通过基因集的富集分数统计图,提供了一种快速、直观的方法来掌握富集的基因集的数量 。

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理解了上面各个部分的结果后,再回过头看这张GSEA分析原理图就简单了 。

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在GSEA软件的左侧提供了Enrichment Map Visualization的功能,点击后GSEA软件会自动调用Cytoscape,建议等待Cytoscape启动后再进行接下来的操作,且保证在分析过程中Cytoscape是处于开启状态 。
选择一个GSEA分析结果,点击Load GSEA Results,其他项为默认值就行,点击Build Enrichment Map以展示基因富集结果的网络图 。(备注:GSEA分析结果用的是和上面演示数据不同的文件,可自行更改)

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运行成功之后会弹出下面的提示框,结果直接展现在了Cytoscape中,如下图所示:

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GSEA富集分析可视化结果是给每个功能基因集富集情况单独出一张图,有的时候我们想要比较基因集在两个不同的GO中的富集情况,利用GSEA软件分析得到的Excel结果表,提取有用的数据结果,在graphpad里进行加工再出图,可以达到我们想要的结果!
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