知识分享:腺相关病毒(AAV)表达系统( 六 )


8.AAV2在研究小鼠脉络膜新生血管形成中作为基因导入的载体
Therapeutic effect of CBAPEDF-AAV2 on choroidal neovascularization development and antibody responses to AAV2 capsid following single and sequential intravitreal injections.A-D:Representative CNV images from mouse eyes that were untreated (A), received a single intravitreal (IV) treatment (B), received first IV treatment (C), and received a second IV treatment (D) of AAV2-PEDF.
Qiuhong Li, Rehae Miller, Ping-Yang Han, Jijing Pang, Astra Dinculescu, Vince Chiodo, William W. Hauswirth. Molecular Vision, 2008, 14:1760-1769.
注射方法:玻璃体腔内注射
注射剂量:4x10E10 V.G.
9.AAV7,8感染视锥形细胞
注射方法:在接近晶状体的虹膜上切开一个小口后 , 缓慢(20-30秒内)注射 。 至少在3个星期后进行后续的实验 。
注射剂量:2ul 。
10. scAAV9 介导的CB-GFP标记静脉注射入大鼠3周后在脑的星形胶质和神经元中表
a:纹状体; b:海马回;c:齿状回;d :小脑浦肯野细胞; e:海马回的椎体细胞f:齿状回的颗粒细胞;a-d 新生鼠 e-f成年鼠(f)200 mm (e); 100 mm (f),50 mm (a–d)Foust K D, et al. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes[J]. Nature biotechnology, 2009, 27(1): 59-65.
注射方法:尾静脉注射
注射剂量:4 × 1011v.p
11.AAV8感染肝脏肝细胞
注射方法:尾部静脉注射
注射体积:200ul、1012v.p
12. AAV9 介导的标记注射成年小鼠7周后在脊髓和大脑的表达
a-d:颈椎 , e-h:腰椎 , i-l:星形胶质细胞 , m-p:脑
Foust K D, et al. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult
astrocytes[J]. Nature biotechnology, 2009, 27(1): 59-65.
注射方法:尾静脉注射
注射剂量:4 × 1012v.p
13. AdVLacZ, AAV2LacZ, 和 AAV8LacZ 介导的标记在C57Bl/6鼠的胰腺中的表达
AdVLacZ AAV2LacZ AAV8LacZ
胰腺胰岛细胞
Wang A Y, et al. Comparison of adenoviral and adeno-associated viral vectors for pancreatic gene delivery in vivo[J]. Human gene therapy, 2004, 15(4): 405-413.
注射方式:胰腺注射
注射剂量: AdVLacZ-108pfu;AAV2 , 8LacZ-1011v.p
AAV比腺病毒的持续表达时间要长很多 , 通常AAV可在体内表达数周甚至数月 , 但是腺病毒仅能表达几天 。
14. AAV-1-6 , 8 和慢病毒介导的GFP在大鼠的脊髓中的表达
Blits B, Derks S, Twisk J, et al.Journal of neuroscience methods, 2010, 185(2): 257-263.
注射方法:脊髓注射
注射剂量:注射5×108v.p不同外壳的AAV 病毒
由图显示 , AAV介导的在大鼠脊髓中的基因表达要比慢病毒介导的表达更高 。 AAV比慢病毒更容易转染脊髓 。
常见问题解答【更多内容详见(维真生物官网→病毒包装→腺相关病毒→FAQs)】
1.什么是Adeno-associated virus (AAV) &重组AAV(rAAV) & helper free rAAV?
腺相关病毒(AAV)属于微小病毒科 , 是一类小的、二十面体、无包膜病毒 。 AAV是一种复制缺陷病毒 , 复制依赖于其他辅助病毒 , 如腺病毒和疱疹病毒 。 AAV不编码自己的聚合酶 , 因此其复制过程依赖于宿主细胞的聚合酶活性 。
重组AAV(rAAV)是人工改造的AAV , 没有编码AAV病毒复制和结构蛋白的rep和cap基因 。 rAAV中与复制和包装相关的rep和cap 基因被替换为ITRs间的基因或结构 , 这使rAAV具有4.1-4.9 kb的包装容量 。
2.使用AAV有哪些生物安全性要求?
可在生物安全1级(BSL-1)实验室操作生产无辅助病毒和编码非致癌基因的重组AAV 。 另外 , 应在生物安全2级(BSL-2)实验室封闭处理具有生物危害性的材料 。
3.重组AAV 安全吗?
迄今为止 , 未发现野生型AAV有致病性 。 野生型AAV , 在无需辅助病毒(如腺病毒)的存在下 , 复制效率非常低 。 重组腺相关病毒(rAAV)由多个质粒(cis质粒、辅助质粒、rep/Cap质粒)组成 。 Cis质粒、辅助质粒与rep/Cap质粒之间不具有同源性序列 , 因此重组AAV在理论上不具有复制的能力 。

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